人(THSD7A)ELISA試劑盒,反應蛋白7A域檢測原理及范圍
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人反應蛋白7A域(THSD7A)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人反應蛋白7A域(THSD7A)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
注意事項:
- 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
- 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
- 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
- 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
- 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
- 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
- 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
- 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
- 不能使用過期產(chǎn)品。
- 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
操作步驟
- 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
- 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
- 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
- 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
- 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
- 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
- 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
- 檢測范圍:3.75 ng/mL – 120 ng/mL。
- 靈敏度:低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
- 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
- 重復性:板內變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。