葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)測試盒微量法
測定意義:葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保證血糖的動態平衡方面起著重要的作用。
測定原理:G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,變旋酶和葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NAD+還原生成NADH,在340nm下測定NADH生成速率,即可反映G6P活性。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)測試盒微量法
需要的儀器,耗材:分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本處理
1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):提取 液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴, 功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液), 進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣本:直接檢測。